细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡是为维持环境稳定，为更好的适应胜春环境而主动争取的一种死亡过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等作用，是一种字体损伤的现象。zui常用的目前就是细胞凋亡检测试剂盒。

细胞凋亡检测试剂盒原理：

细胞凋亡是细胞的基本特征之一，在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V是一种分子量为35.8 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）高亲和力特异结合。FITC-Annexin V结合到凋亡细胞后，在蓝色光的激发下，发出绿色荧光，区分出凋亡细胞与正常细胞。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）是一种核酸染料，它不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。将FITC-Annexin V与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞区分开来。

细胞凋亡检测试剂盒使用步骤：

1. 调整待测细胞的浓度为5×105-1×106个/ml。 2. 取1ml细胞，1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清。 3. 加入1ml预冷的PBS，轻轻震荡使细胞悬浮，1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清（对于贴壁细胞，先用胰酶消化，再用PBS洗涤）。 4. 重复步骤3两次。 5. 将细胞重悬于200μl Binding Buffer。 6. 加入10μl Annexin V-FITC和10μl PI，轻轻混匀，避光室温反应15分钟 或4℃反应30 分钟。 7. 加入300μl Binding Buffer，在1小时内用流式细胞仪检测。 8. 若用荧光显微镜检测，将细胞混合液离心，取细胞沉淀涂片，再进行观察。

使用细胞凋亡检测试剂盒的注意事项：

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物质，在保存与操作时请注意避光。

3.Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用。

4.在细胞洗涤的zui后一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留影响实验结果。

 5.PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC染色，上机前5分钟再加入PI染色。

6.整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作。

7.反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰变。

8.成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的。