流 式 细 胞 术：

是当代最先进的细胞定量分析技术之一，它是在流动的状态下，快速地检测细胞或颗粒的特异性指标，实现对多个检测目标多参数特性分析。具有特异性强，灵敏度高，速度快，可分析、可分选的特点。流式细胞术检测信号分为散射光信号和荧光信号两种。

散 射 光 信 号
散射光信号分为前向散射光和侧向散射光，前者也叫小角度散射光，后者也叫90°角散射光。

前向散射光（forward scatter, FSC）是正向收集的散射光信号。一般来说，FSC可以反映细胞的大小，FSC强则细胞大一些，反之则细胞小一些。但当检测目标为非球形细胞（如红细胞、精子等），由于细胞在液流系统中的朝向不一致，通过激光检测时容易出现同型细胞FSC差别很大，这个需要特别注意。

侧向散射光（side scatter, SSC）是侧向收集的散射光信号。SSC对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感，其强度与细胞内部的精细结构和颗粒性质有关。通常，一个细胞内部细胞器和颗粒越多，其SSC就越强。

利用FSC/SSC双参数测定，可以从一些未添加荧光染料的样本中鉴别出若干个细胞亚群。最为经典的就是利用FSC/SSC双参数将人外周血白细胞分为淋巴细胞、单核细胞和粒细胞三个亚群（如下图），淋巴细胞FSC和SSC均较小，单核细胞FSC较大、SSC中等，粒细胞FSC和SSC均较大。

荧 光 信 号

荧光信号也分为两种。一种是细胞自身就有的荧光在激光照射下发出的荧光信号，称为细胞自发荧光；另一种是人为用特异性荧光素标记细胞，如用荧光素标记的单克隆抗体特异性地结合胞膜、胞质、核膜的相应抗原，这些荧光素通过激光激发产生的信号。荧光信号的强弱反映了细胞抗原的表达含量，通过荧光信号我们可以对细胞亚群和功能进行

荧光素的选择一般遵循几个原则：① 仪器需满足激光管可激发相应的荧光素且可同时检测所需的荧光；② 染料的亮度与抗原表达量相匹配，低表达抗原，推荐使用亮荧光染料，高表达抗原，推荐使用弱荧光染料；③ 尽量选择光谱重叠小的荧光素，光谱重叠严重的荧光素同时检测会导致荧光溢漏，需调节补偿；④ 尽量使用红色激光激发自发荧光高的样本。

流式细胞术的应用颇为广泛，利用两种检测信号可实现对细胞大小、颗粒度及内部结构（如细胞器）、细胞状态（凋亡/周期）、细胞内离子（Ca2+、pH、ROS）、细胞表型等的检测分析。