使用方法

一、储存液和工作液制备

1）储存液制备：用Hepe缓冲盐溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl）溶解Dispase II冻干粉，配制成10mg/ml的储存液，用0.22µM滤膜过滤除菌。本储存液置于2-8℃，2周稳定；根据单次用量分装冻存，高达2个月稳定，避免反复冻融。

2）工作液制备：使用时用合适的细胞培养液将储存液稀释到工作液浓度即可，常用工作浓度为0.6-2.4 U/ml。不推荐使用>2.4 U/ml的工作浓度。具体使用浓度请根据自身实验体系或参考文献来调整。

二、组织分离

1）用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片，之后用无菌PBS缓冲液清洗组织片几次；

2）用Dispase II工作液（0.6-2.4 U/ml）浸没并37℃孵育进行组织解离；

3）置于水平摇床上，低速转动，37℃孵育直至组织完全解离；【注意】：第一次使用Dispase II，通过细胞计数来确定总反应时间。对于坚硬致密组织需要1h的孵育时间，不过孵育时间几小时也不会有副作用。

4）若有需要，将消化产物用无菌不锈钢网过筛，从而分离解散细胞和残留组织，或当更大片段组织静置到管底，轻轻倒出上层细胞。若需要进一步解离，则加入新鲜的Dispase II工作液到残留组织。

5）低速离心收集细胞，吸掉酶工作液；

6）用适当的细胞培养液重悬细胞，置于正常预优化条件下培养。

三、细胞亚培养

1）用37℃预热的Dispase II工作液完全覆盖细胞，置于37℃孵育5min；

2）吸掉溶液，于37℃再孵育10min；

3）显微镜观察以确定消化情况，若有需要，可再孵育15min；

4）用细胞培养液重悬细胞，低速离心并用培养基清洗细胞几次；

5）用新鲜细胞培养液重悬细胞；

6）按照常规方法进行分盘传代。

注意事项

1）Dispase是Godo Shusei Co., Ltd.的注册商标。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。