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0.5%牛血清白蛋白储备液的制备步骤
来源于:开云体官网入口·(中国),浙江联硕生物科技有限公司 | 发布时间:2022/11/24 9:08:00

操作步骤
1 .标准曲线的绘制
(1) 配置标准牛血清白蛋白溶液:在分析天平上精确称取 0.025g 结晶牛血清白蛋白,倒至小烧杯内,加入小量蒸馏水溶解后转入 100m1
容量瓶中,烧杯内的残液用少量蒸馏水冲洗数次,冲洗液一并倒入容量瓶内,最后用蒸馏水定容至刻度,配制成标准蛋自质溶液,其中牛血清白蛋白的浓度为 250 ug/ ml
(2) 系列标准牛血清白蛋白溶液的配制:取具塞试管 6 支,按下表加入牛血清白蛋白标准溶液及蒸馏水。然后各管加入试剂甲 5ml ,混合后在室温下放置
10min ,再加 0.5ml 试剂乙,立即混合均匀(这一步速度要快,否则会使显色程度减弱)。 30min 后,以不含蛋白质的 1 号试管为对照,与其他 5
支试管内的溶液依次用分光光度计于 5OOnm 波长下比色。记录各试管内溶液的吸光度。
试剂 1 2 3 4 5 6
250ug/mg 牛血清蛋白( ml ) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
H 2 O (ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0
蛋白质含量( ug ) 0 50 100 150 200 250
(3) 标准曲线的绘制:以吸光度为纵标,以牛血清自蛋白含量( ug )为横坐标,绘制标准曲线。
2 .样品测定
1) 称取绿豆芽下胚轴 1g 于研钵中,加蒸馏水 2m1, 匀浆。转入离心管,并用 6m1 蒸馏水分次洗涤研钵,并入离心管。 4000r/min 离心 20min. 弃去沉淀,上清液转入容量瓶,定容至 10m1.
(2) 取具塞试管 2 支,各加入上清液 l ml, 分别加入试剂甲 5m1, 混匀后放置 lomin ,然后加试剂乙 0.5 ml ,迅速混匀,室温下放置 30min ,于 500nm 波长下比色,记录吸光值。

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