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蛋白酶k在DNA提取中的作用
来源于:开云体官网入口·(中国),浙江联硕生物科技有限公司 | 发布时间:2022/11/15 15:26:00

蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌(tritirachiumalbumlimber)中纯化得到。蛋白酶k,是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶k在尿素和SDS中稳定,还具有降解天然蛋白质的能力,因而它应用很广泛,包括制备脉冲电泳的染色体DNA,蛋白质印迹以及去除DNARNA制备中的核酸酶。蛋白酶k的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH4-12.5)均有活性。值得注意的是,蛋白酶k在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶k的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.EDTA缓冲液可以替代蛋白酶k的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果

 

在生物相关的领域当中,经常需要对DNA进行提取分析,这样就可以快速有效地判断生物种类,还可以更深入地对基因组成进行研究,而这类研究当中非常关键的一步就是从细胞当中提取出DNA。要知道DNA处在细胞核当中,如果采取简单粗暴的手段来破坏细胞结构,也会同时破坏了更加脆弱的DNA结构,导致研究无法继续进行下去。而有了蛋白酶k的帮助,就能有效分解细胞当中的所有蛋白质,从而把细胞核里面的DNA释放出来,而且结构完全不会受影响。提取出来的DNA不但能够保持完整性,而且还保持了生命的活性,能够通过简单的方式进行增殖。

 

那么如何才能更好的保存蛋白酶k呢?

只要将蛋白酶k保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,就能有效保证12月。而使用时也要注意,孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。

 

以上为大家介绍的就是蛋白酶kDNA提取中的作用,有了这种技术,也就可以更方便更准确地进行生物基因领域的研究目前这种技术也进入到了实际的生产当中,在遗传育种以及疾病治疗当中都发挥了重要的用途。

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