尿苷二磷酸葡萄糖的制备
来源于:开云体官网入口·(中国),浙江联硕生物科技有限公司 | 发布时间:2021/12/31 10:01:00
制备及其进展
方法:提取基因组DNA作为模板,通过PCR扩增得到酶基因,经DNA体外重组构建表达质粒。结果:实现在大肠杆菌中的表达,并成功转化黄原胶菌株。转化过程提示黄原胶菌株可能具有某些特殊性。
建立了一种经济、简便的一步酶法,大量合成尿苷二磷酸葡萄糖。在酶法合成中,用UTP代替ATP,并建立了UTP的再生系统;建立了反复补加法和酶回收法,使酶的利用率达到最高。
黄原胶是由野油菜黄单胞菌(Xanthomonascampestris)分泌的胞外杂多糖,是目前产量最高的微生物多糖之一,具有假塑性、温度和pH稳定性,以及与盐类良好的相容性,广泛应用于食品、石油、化工、医药等领域。国外关于黄原胶的研究从20世纪60年代起步,国内自70年代开始,包括菌种选育、发酵工艺研究、黄原胶理化性质探讨及其免疫学活性分析等。经查阅资料发现,在黄原胶的合成过程中,含糖的底物需要尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶(uridinediphosphateglucosedehydrogenase,UDPGD)的催化才能生成葡萄糖醛酸,而后者是黄原胶生物合成的前体之一。故此,我们设想以黄原胶菌株基因组DNA为模板,通过合成引物、扩增、克隆得到UDPGD基因,在实现大肠杆菌的表达后,再转入原黄原胶菌株,希望UDPGD酶量的增加能够带来黄原胶产量增加的正效应。文献报道UDPGD基因全长1338bp,285bp处含PstⅠ切点,740bp处含BamHⅠ切点,编码445个氨基酸,蛋白相对分子质量48432。经过实验,我们对UDPGD的研究工作取得了初步结果。
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