1. 吸附法
优点:做作条件温和、简便;成本低;载体可反复使用
不足:对离子强度、pH、温度等因子敏感,故酶易损漏,且酶转载容量较小
2.共价偶联法
优点:载体与酶偶联的方法多样化;固定化的酶非常稳定,损漏少
不足:偶联试剂对生命组织多有一定毒性;偶联条件激烈,易引起酶失效;成本较高
3.交联法
优点:可用的交联试剂多,技术简易;稳定性较高
不足:交联条件较激烈,常出现扩散限制,使用有一定难度
4.包埋法
优点:可进行大量的固定化;包埋膜可选用生物相容材料,并可做成任意大小;胶格包埋用胶可做成所需要的厚度与硬度
不足:仅可用于低分子量的底物,不适用于柱系统,反应常受扩散限制,不是所有单体材料与溶剂都适用于各种酶
酶固定化后一般稳定性增加,易从反应系统中分离,且易于控制,能反复多次使用。便于运输和贮存,有利于自动化生产,但是活性降低,使用范围减小,技术还有发展空间。固定化酶是近十余年发展起来的酶应用技术,在工业生产、化学分析和医药等方面有诱人的应用前景。
优点:
①固定化酶可重复使用,使酶的使用效率提高、使用成本降低。
②固定化酶极易与反应体系分离,简化了提纯工艺,而且产品收率高、质量好。
③在多数情况下,酶经固定化后稳定性得到提高。
④固定化酶的催化反应过程更易控制。
⑤固定化酶具有一定的机械强度,可以用搅拌或装柱的方式作用于底物溶液,便于酶催化反应的连续化和自动化操作。
⑥固定化酶与游离酶相比更适于多酶体系的使用,不仅可利用多酶体系中的协同效应使酶催化反应速率大大提高,而且还可以控制反应按一定顺序进行。
缺点:
①固定化可能造成酶的部分失活,酶活力有损失。
②酶催化微环境的改变可能导致其反应动力学发生变化。
③固定化酶的使用成本增加,使工厂的初始投资增大。
④固定化酶一般只适用于水溶性的小分子底物,对于大分子底物不适宜。
⑤与完整菌体细胞相比,固定化酶不适宜于多酶反应,特别是需要辅助因子参加的反应。
⑥胞内酶进行固定化时必须经过酶的分离纯化操作。
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