相信做过 PCR 实验的伙伴,一定有跟我一样的感受,坑多,且让人防不胜防!辛辛苦苦做半天,PCR 做出来还是假阳性......做完 PCR,蒸发了一半,开盖手抖洒了......PCR 管居然融化变形,盖打不开了?而且 PCR 扩增效率极低...... 令人抓狂是好不容易出一次满意结果,迟迟不能复现.......「坑」虽多,吐槽完,实验仍要继续,如何提前避开才是重中之重。造成这些结果的原因有很多,模板质量不佳、引物、退火温度不合适等等,但还有一个容易被忽略因素:PCR 耗材,它出问题会导致出现样品蒸发、漏液等实验事故,甚至直接导致实验失败。PCR 反应是升降温循环反应,样品蒸发的影响不容忽视,对于如XG检测应用的 qPCR 实验,体系的体积稳定性及透光性对检测的灵敏度也有干扰。虽然高透的管盖、8 联管管盖起到了一定的保护作用,但密封效果一般,关盖与开盖过程繁琐、高温让盖子变形等情况,会直接造成漏液、气溶胶污染等问题,想想就令人头大......为了尽可能规避以上问题出现,不让 PCR/qPCR 实验付之东流,在使用 PCR 板时,自粘膜逐渐成为实验优选。但不同来源的自粘膜的品质参差不齐,密封不严,透光性不佳,不能适用于小通量也是使用 PCR/qPCR 膜的制约之处。
qPCR 高透膜:用于 PCR 板或者酶标板,几乎适合所有板型。
高度透明并具有极小的自体荧光,适用于 qPCR、ELISA 等荧光或显色分析实
压力敏感型膜,只有在施加压力时才具有粘性,因此封闭时反应孔上方的膜粘性很小,可有效减少样品黏附(原理见下图)
压力敏感型膜的原理
BRAND 压敏型高透膜
普通 PCR 膜
用于 PCR 板或者酶标板,几乎适合所有板型。
透光,适合肉眼或者光学观察,适用于 PCR、ELISA、EIA 等显色分析实验。
边条便于拿取,强粘性保证密封效果。
PCR/储存膜
用于 PCR、ELISA 或样品储存。适合 -80 ℃ 样品冷藏,
耐受 DMSO 与溶透明可用于显色分析实验或肉眼观察。可撕开重复使用。
能够封住 PCR 板的膜千篇一律,真正耐高温、蒸发少、透光好的膜万里挑一。
实验表明,BRAND 压力敏感型高透膜可以更有效地密封 PCR 板,减少蒸发(见下图)。
使用 BRAND 压敏型高透膜与不同 PCR 自粘膜 25 个循环后的蒸发率比较实验,
PCR 板为 BRAND。实验显示 BRAND 压敏型高透膜可显著减少 PCR 反应体系的蒸发。
想要 PCR 实验不踩「坑」,选对膜很重要,温馨提示:有了膜可别忘了封膜神器哦!
BRAND 封膜用刮板
正所谓:
古今 P-C-R,
贴膜锁乾坤,
多少实验事,
都付笑谈中…