一、样本来源:
对于IHC,组织是来自患者或动物,经过冷冻或石蜡包埋。然后切成约4μm厚的切片。对于ICC,大部分细胞外基质被去除,只剩下整个细胞来染色,来源可以是细胞悬液,或组织培养细胞系。
然而IHC远远不止于把抗体放在组织切片上、然后用显微镜观察那么简单。要想得到实用、可靠而清晰的结果,就需要耐心的对每一步进行优化。根据标记物的不同分为免疫荧光法和免疫酶法,R&DSystems的网站列出了IHC/ICC实验设计和优化的变量及影响因素如下:
样本类型:组织或细胞
样本制备:组织(石蜡或冰冻),细胞:(贴壁细胞或细胞悬液)
适当对照:无一抗,组织类型。
固定方法:灌注或浸泡。
固定剂:甲醛,醇类,bing酮。
封闭液:正常血清,牛血清蛋白(BSA)或脱脂奶粉。
抗原修复:蛋白酶,加热。
检测方法:直接或间接
一抗:物种
二抗:物种
标记物:荧光或酶(显色)
复染剂:苏木jing或DAPI(荧光)
封片剂:抗淬灭或水性
显微镜观察:荧显微镜或光学显微镜
二、处理不同样本的区别 :
ICC需要透化,要么通过固定过程,要么是单独的透化步骤,而IHC可能不需要单独的透化步骤,这取决于切片的厚度和固定方法。包埋在石蜡中的组织样本在抗体染色前需要进一步处理。一旦处理好样品,IHC和ICC的染色操作就几乎没什么差异了。
三、样本固定和制备:
组织石蜡包埋前的组织固定:4%甲醛固定剂是组织灌注和浸润固定的常用溶液,一般需要4–24h,能很好地保留组织形态,切片机切片,贴附于载玻片干燥,石蜡切片存储室温多年,后续进行IHC/ICC之前需要再水化,需要抗原修复。
培养细胞固定:2%甲醛室温固定20min,细胞样本贴附载玻片,对于贴壁细胞直接放在6孔或24孔底部的高级无菌载玻片上生长,悬浮细胞可通过与包被多聚赖氨酸的载玻片孵育10min而附着在载玻片上。
冰冻组织切片固定:切片后用醇类固定,用于检测磷酸化依赖的表位,在低温箱进行样本切片,冰冻切片存储–80℃多达一年。通常保留酶的活性和抗原功能,不需要抗原修复,冰晶的形成可能负面影响组织结构。
-
2024-07-25
-
2024-07-24
-
2024-07-23
-
2024-07-22
-
2024-07-19
- ▪ 端午放心吃!粽子抽检全都合格
- ▪ 联硕生物:美媒:孩子最可能11岁时尝试大麻!
- ▪ ELISA试剂盒组成与常见ELISA试剂盒分类
- ▪ 联硕生物:烧烤食物吃多了会患癌嘛?
- ▪ ELISA操作要点:ELISA实验18条通用规则
- ▪ 联硕生物:股神”巴菲特确认收购医疗责任承保公司
- ▪ ELISA试剂盒免费代测服务
- ▪ 联硕生物:秋天我们为什么会莫名其妙心情不好?
- ▪ 《Science stars of China》共选出十位中国科学之星!
- ▪ 联硕生物:美国总统奥巴马计划以后投资“生物医学”领域
- ▪ 联硕生物:“超级细菌”的耐药性基因可遗传是真的吗?
- ▪ 联硕生物:小鼠是如何做到活到140岁的
- ▪ 联硕生物:洗衣机影响人类生殖力下降吗?