当贴壁细胞生长铺满培养容器后将无法继续生长，同时细胞活性会受到抑制，因此需要在其长满前进行消化传代操作，一般使用胰蛋白酶消化法进行，胰酶可水解消化细胞的贴壁连接蛋白，使细胞从壁上脱落。悬浮细胞因其不贴壁，可直接分瓶传代。

操作方法：

①使用PBS清洗细胞2次；

②加入胰蛋白酶，37℃孵育一定时间；

③待细胞收缩成圆形或成片脱落后，加入完全培养基终止消化，将细胞吹下并转移至离心管；

④离心后弃去上清液，使用新鲜的完全培养基重悬细胞，分装接种至培养器皿。

注意事项：细胞消化时间应根据不同细胞特性进行调整，消化时间不可过长，消化过久会对细胞造成较大损伤，降低存活率，影响细胞形态，同时也不可在消化不足的情况下强行将细胞吹下，这同样会对细胞造成损伤。

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