一、透析的原理
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。
二、透析的过程
1)把适量的透析液(缓冲液)加入透析装置。透析液的体积应为样品体积量的100倍。(例如,在1L透析液中透析10ml的样品)
2)裁剪适当长度的透析管。预留一段额外长度(约占总样品体积量的20%)作为头部空间。
3)把透析管插入打开的透析夹,在约超出透析夹3-5mm的位置再夹住。不要折叠透析袋。
4)由透析管开口端将样品装入。调整一下顶部空间的长度,夹紧透析夹。
5)把透析样品放在合适的透析缓冲液中。
6)透析要根据具体的应用需求。通常情况下,允许过夜透析。在持续透析的过程中,至少要进行3次全部更换透析液。建议在(透析后)2-4小时,6-8小时和10-14小时(第二天早晨)更换透析液。在最后一次透析液的更换后,要至少继续进行2小时的透析。
注意:对于高浓度污染物,样品可能需要较长的时间透析,透析液需要更频繁的更换。
7)透析温度主要取决于样品。温度最高限制主要取决于膜的类型。纤维素透析袋可以承受的温度高达37℃。再生纤维素透析袋可以承受的温度高达60℃。
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