原理

用Trizol 的溶液提取，将总RNA与 DNA 和蛋白质分离。Trizol 是一种酸性溶液，含有硫氰酸胍 (GITC)、苯酚和氯仿。GITC 不可逆地使蛋白质和 RNase 变性。随后进行离心。在酸性条件下，总 RNA 保留在上层水相中，而大部分 DNA 和蛋白质保留在中间相或下层有机相中。然后通过用异丙醇沉淀回收总 RNA。RNase 酶可以通过加入吡咯碳酸二乙酯 (DEPC) 来灭活。

步骤

组织：每 100 毫克新鲜组织加入 1 毫升 TRIzol 试剂，使用无菌手术刀在冰上切碎，并用无菌匀浆器或其他设备匀浆。

细胞：如果是细胞培养物，应在从培养箱中取出后立即进行处理。细胞在室温（15-25 ºC）下以 1000rpm 离心5 分钟，然后丢弃上清液或从单层生长的细胞中去除培养基，用预冷PBS洗一次。每 1 × 10<7> 细胞加入 1 ml TRIzol 试剂。

1. 4°C 预冷离心机

2. 将组织或细胞裂解液转移到 1.5毫升无RNA酶EP管中。置冰上，静置 5 分钟。

3. 每管加入200ul氯仿，充分混合后冰上静置10分钟，使核蛋白复合物完全解离。

4. 在 4°C 下以 13000 rpm离心 15 分钟。期间，取一新EP管，加入500ul异丙醇，冰上预冷。

5. 离心后，将上层水相 (约500 ul) 转移到该新的 EP管中。

6. 冰上静置，酒精沉淀10min。

7. 离心， 13000 rpm， 10 分钟。

8. 去除上清液。用 1ml 75% 乙醇洗涤 RNA 沉淀一次。

9. 12000rpm离心 5 分钟。

10. 去掉上清，风干或真空干燥 RNA 沉淀 5-10 分钟。

11. 将 RNA 溶解在30-50ul DEPC 处理过的去离子水中（需根据RNA沉淀的量加水溶解）。

12. 进行分光光度分析以确定样品浓度和纯度。

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