脂质体转染的操作步骤
来源于:开云体官网入口·(中国),浙江联硕生物科技有限公司 | 发布时间:2023/12/22 17:27:00
操作步骤:
(1) 细胞培养:取 6 孔培养板 (或用 35 mm 培养皿),向每孔中加入 2 mL 含 1~2×105 个细胞培养液,37℃ CO2 培养至 40%~60% 汇合时 (汇合过分,转染后不利筛选细胞)。
(2) 转染液制备:在聚苯乙稀管中制备以下两液 (为转染每一个孔细胞所用的量)A 液:用不含血清培养基稀释 1-10 μg DNA,终量 100μL,B 液:用不含血清培养基稀释 2-50 μgLR,终量 100μL,轻轻混合 A、B 液,室温中置 10-15 分钟,稍后会出现微浊现象,但并不妨碍转染 (如出现沉淀可能因 LR 或 DNA 浓度过高所致,应酌情减量)。
(3) 转染准备:用 2 mL 不含血清培养液漂洗两次,再加入 1 mL 不含血清培养液。
(4) 转染:把 A/B 复合物缓缓加入培养液中,摇匀,37℃ 温箱置 6~24 小时,吸除无血清转染液,换入正常培养液继续培养。
(5) 其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。
注意:转染时切勿加血清,血清对转染效率有很大影响。
*以上内容来自网络
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