如何铺出均匀的细胞培养板?
来源于:开云体官网入口·(中国),浙江联硕生物科技有限公司 | 发布时间:2023/11/17 17:18:00
细胞居中和细胞边缘化
从经济和高效的角度来说,需要根据实验目的选择不同规格的培养板。如在进行药物对待测细胞半抑制率(IC50)测试时,通常使用96孔板,一方面可以设置浓度梯度;另外还可一次性测多个药物,减少实验误差。
收集细胞要混匀
消化后的细胞一定要充分混匀,要把聚在一起的细胞团充分地吹打开,最好是单个的状态,但同时又不能损伤细胞,可以用玻璃吸管的移液器操作。离心也很有讲究,一般用1000 rpm/min即可。离心力太大细胞容易抱团,然后悬浮离心后的细胞团时,先不要把所有液体都加进,一般先加2mL液体,然后用1mL移液器轻轻将细胞吹起,细胞要像云雾一样散开,这样易于形成单细胞。
铺6孔板,12孔板或24孔板,先在每个孔里面加1mL的培养基,晃动使之铺匀整个孔底,然后加入1 mL的细胞悬液。从孔的左边靠近底部慢慢加入,这样细胞悬液会平铺在整个孔底,细胞分散较均匀,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这里又有一个窍门,放在显微镜的载物台上面。因为显微镜的载物台是水平校正过的,比什么桌面、超净台什么的要平多了。在载物台上放置20-30分钟,细胞不差这一会温度和二氧化碳的,等细胞贴壁了,轻轻移入到孵箱中。
铺96孔板,我每孔是加100微升细胞悬液,加完半边板48孔后,将剩下的未加的细胞悬液再混一下,再继续加剩余的半边板子,都加完后盖上盖子,左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度,敲三次即可,太大力或次数太多会导致细胞集中成堆。
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