细胞居中和细胞边缘化

从经济和高效的角度来说，需要根据实验目的选择不同规格的培养板。如在进行药物对待测细胞半抑制率（IC50）测试时，通常使用96孔板，一方面可以设置浓度梯度；另外还可一次性测多个药物，减少实验误差。

收集细胞要混匀

消化后的细胞一定要充分混匀，要把聚在一起的细胞团充分地吹打开，最好是单个的状态，但同时又不能损伤细胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。离心也很有讲究，一般用1000 rpm/min即可。离心力太大细胞容易抱团，然后悬浮离心后的细胞团时，先不要把所有液体都加进，一般先加2mL液体，然后用1mL移液器轻轻将细胞吹起，细胞要像云雾一样散开，这样易于形成单细胞。

铺6孔板，12孔板或24孔板，先在每个孔里面加1mL的培养基，晃动使之铺匀整个孔底，然后加入1 mL的细胞悬液。从孔的左边靠近底部慢慢加入，这样细胞悬液会平铺在整个孔底，细胞分散较均匀，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这里又有一个窍门，放在显微镜的载物台上面。因为显微镜的载物台是水平校正过的，比什么桌面、超净台什么的要平多了。在载物台上放置20-30分钟，细胞不差这一会温度和二氧化碳的，等细胞贴壁了，轻轻移入到孵箱中。

铺96孔板，我每孔是加100微升细胞悬液，加完半边板48孔后，将剩下的未加的细胞悬液再混一下，再继续加剩余的半边板子，都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度，敲三次即可，太大力或次数太多会导致细胞集中成堆。