RNA提取实验的步骤
来源于:开云体官网入口·(中国),浙江联硕生物科技有限公司 | 发布时间:2023/6/20 16:44:00
RNA 提取是指从样品中纯化 RNA 的过程。 RNA提取的常规方法称为硫氰酸胍-苯酚-氯仿提取。 Guanidinium thiocyanate 使蛋白质变性。此外,它破坏水分子的氢键并用作离液剂。 RNA 提取中使用一种特殊试剂,称为三试剂。它含有硫氰酸胍、苯酚和乙酸钠。 RNA 提取的基本步骤的目的与 DNA 提取的目的相似。 RNA 提取的方案如下所述。
1. 用冰冷的 PBS 洗涤细胞以维持细胞的渗透压。
2. 吸出细胞并用 Tri-reagent 匀浆样品。
3. 加入氯仿并摇匀。
4. 离心可能会出现三层。顶层是透明的水层。中间层或界面包含沉淀的 DNA。底层是有机层,呈粉红色。
5. 除去水层并加入异丙醇。离心可能会产生沉淀。
6. 用 75% 乙醇清洗沉淀。空气干燥颗粒。
7. 用 TE 缓冲液或水溶解沉淀。
RNA 提取一般在 pH 值低于 7 时进行。在碱性 pH 值下,由于核糖的 2' 位置存在 OH 基团,RNA 更容易被碱性水解降解。 此外,RNA 在酸性 pH 值下倾向于保留在水相中。
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