1.制备培养滤液

摇好的培养液，细胞筛过滤去菌丝球，离心去细小菌丝 ，0.22uM过滤去细小颗粒。

2.超滤浓缩、更换buffer

1）新买的超滤管使用Milli-Q 水进行预清洗。定角转子，使超滤内管的膜面朝上，膜与轴垂直。加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。

2）脱盐或更换缓冲液是从含有生物分子的溶液中去除盐分或溶剂的重要方法。盐分去除或缓冲液的更换可通过超滤管来完成。

上超滤柱之后4度离心，离心时间很长，协调好离心机。4度，5000g，每半小时查看离心状况。

浓缩至1 ml轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜过滤），再浓缩至1ml。

该过程可反复进行，直到杂质的浓度被充分降低。3-5次后基本更换buffer成功。一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。

3）取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。

4）处理超滤管，重复利用超滤管

倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，若管底有可见的蛋白沉淀，先加入水，然后用枪头轻轻吹打，然后倒掉。然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，用MilliQ水洗干净，放4度保存，直到下次使用。一般来说，每根管用三四年不会坏。