细胞复苏和冻存讲究“慢冻快溶”，复苏时一定要将冻存在液氮或-80℃中凝固的细胞冻存液快速融化至37℃，使胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。

实验材料：

离心管、细胞培养瓶、移液管

实验步骤：

●打开水浴锅加热至37℃。

● 超净台上放好离心管（离心管规格选用15ml的），细胞培养瓶，移液管，紫外灭菌至少20至30分钟，吹风5至10分钟除去臭氧。

● 37℃预热好要复苏细胞的培养液，也可以不用预热培养液，根据细胞情况选择。

●向离心管中加约5至10ml培养液，从液氮罐或-80℃中取出冻存细胞，立即将冻存管放入37℃水浴中并轻轻摇动，待融化后（约2min即可）立即将解冻的细胞转移至含培养液的离心管中，800-1000rpm下离心5min，弃上清，加适量完全培养液轻轻吹打重悬细胞后转移至细胞培养瓶中，轻晃使瓶底液体分散均匀，标好细胞名称、代数、复苏日期，显微镜下观察后放入37℃，5%CO2培养箱中。一般贴壁细胞过夜即可贴壁，换液和传代时间根据不同细胞生长情况而定。

实验注意事项：

复苏时动作要快，尽量减少胞内形成冰晶，影响复苏后细胞活率。

1. 融化时尽量不要碰到管口，以免容易造成污染。

2.若一次性需要复苏细胞很多，可以分批水浴解冻，防止传热不佳使得细胞融化时间延长。

3.若需要同时复苏好几种细胞，提前在离心管和培养瓶上做好标记，或记住自己摆放的位置，不要弄混乱。